Оки тест кала

Оки тест кала

Анализ на кишечные инфекции проводится с целью обнаружения патогенной микрофлоры в желудочно-кишечном тракте. Данное исследование является основой для диагностики заболеваний бактериальной природы. Благодаря ему можно выявить вид микробов и определить, какое лекарственное средство действует на них.

Общие представления об исследовании

Для обследования на кишечную группу берут различные биологические среды. К ним относится:

  • кровь;
  • каловые массы.

Расстройство желудкаИсследование проводят для определения количества условно-патогенной флоры. Эта те микроорганизмы, которые при определенных условиях могут вызвать различные проявления гастроэнтерита.

Анализ назначают в следующих клинических случаях:

  • при наличии симптомов отравления, таких как рвота, понос;
  • при поступлении в инфекционный стационар;
  • периодические медицинские осмотры;
  • в случае контакта с больным острой инфекцией;
  • для диагностики эффективности проводимого лечения.

Основной целью является идентификация возбудителя по его морфологическим свойствам и определение чувствительности к действию антибиотических средств. Это является залогом успешного лечения.

Забор материала может проводиться в стационарных условиях или на дому. Все зависит от состояния и цели назначенного исследования.

В обязательном порядке анализ на кишечную группу сдают:

  • работники медицинских учреждений;
  • лица, работающие на пищевом предприятии и с приготовлением готовой пищи;
  • воспитатели детских садов.

Данный контингент обследуют один раз в год. Это необходимо для предотвращения вспышек инфекции. Особенно это важно для детских садов. Так как скученности коллектива способствует быстрому разносу инфекции.

Исследование кала на кишечные инфекции

Исследование калаТест на определение патогенной флоры проводится путем серологических, бактериологических и микробиологических методов. Изначально проводят микроскопию материала. То есть в нативном препарате под микроскопом оценивают возбудителя. Однако такое возможно только после нескольких дней заражения.

В соответствии с результатами микроскопии определяют, на какую именно питательную среду будут сеять материал. Для этого используют специальные чашки со средой, содержащей в себе вещества для роста микробов. Создаются условия для их развития, затем проводится определение морфологических свойств.


В случае обнаружения патогенных микроорганизмов, обязательно проводится исследование на антибиотикорезистентность.

Это позволит врачу с точностью назначить терапию.

Как подготовится к анализу?

Перед исследованием не стоит употреблять следующие препараты:

  • железосодержащие;
  • висмута трикалия дицитрат;
  • различные энтеросорбенты, например, активированный уголь;
  • слабительные;
  • антибиотики широкого спектра действия.

Желательно прекратить прием за неделю до анализа.

Контейнеры для анализа калаКак сдавать анализ на кишечные инфекции, подробно расскажет врач. Но следует знать следующие особенности сбора кала на анализ и что туда входит:

  • для исследования следует использовать только стерильную посуду;
  • существуют специальные контейнеры с маленькой ложечкой для удобства сбора;
  • если же не удалось приобрести такой контейнер в аптеке, можно взять обычную баночку, предварительно ее прокипятив;
  • собирать каловые массы лучше утром;
  • доставить материал в лабораторию желательно сразу после сбора;
  • перед сбором, помыть наружные половые органы, это снизит риск ошибочных результатов;
  • не правильно собирать материал из унитаза, нужно заранее подготовить контейнер;
  • ни в коем случае нельзя использовать клизму перед забором кала, это обеспечит ложноотрицательные результаты.

Хранить контейнер с материалом можно в холодильнике. Но нельзя его замораживать. Это в корне изменить бактериологический состав кала.

Анализ кала на кишечные инфекции готовится в течение 5 дней. Этот срок обусловлен ростом микроорганизма и его идентификацией.

Результаты исследования могут быть следующие:

  1. Микрофлора представлена бифидо- и лактобактериями. Эти микробы нормальные обитатели организма человека и не предоставляют опасность.
  2. Кишечная палочка также естественный представитель флоры. Но ее содержание незначительное. Но не стоит забывать, что при снижении местного иммунитета слизистых, она может вызвать дисбиоз.
  3. В анализе могут встретиться и представители патогенной флоры. К ним относят:
    • сальмонеллы;
    • шигеллы;
    • клебсиелы;
    • протей.

Кишечник заселен на 90% только бифидобактериями. Наличие патогенных микробов вызовет возникновение гастроэнтерита.

В бланке результатов напротив графы определенного вида микроба ставится плюс в случае его наличия, минус – если он не был обнаружен. При определении резистентности напротив каждого вида пишется группа антибиотиков и уровень чувствительности к нему. Чем больше плюсов, тем меньше устойчив микроб к антибиотику.

Исследование крови


Анализ кровиАнализ крови на кишечные инфекции базируется, на сдачи материла для общего и серологического исследования.

Суть общего анализа крови заключается в определение гематологических сдвигов клеток крови. То есть патогенная флора вызывает воспаление желудочно-кишечного тракта. По-другому такое состояние называют гастроэнтерит. Он проявляется рвотой, поносом, урчанием и болями в животе. Первой в организме на такие изменения реагирует кровь.

В общем анализе крови при кишечных инфекциях наблюдается следующее:

  • повышенный уровень лейкоцитов;
  • увеличение СОЭ;
  • сдвиг лейкоцитарной формулы влево.

Данные изменения описывают наличия воспаления. А врач уже по клинической картине делает вывод о том, где очаг.

Еще одним исследованием, позволяющим с точностью сказать о кишечной инфекции, является серология. Это такой метод определяющий уровень антител в крови.

В организме на любой патологический процесс вырабатываются антитела. Следовательно, при кишечных инфекциях они тоже есть.


Обычно проверяют уровень иммуноглобулинов М и G. Серологию берут при обследовании на носительство кишечных инфекций. Это связано с тем, что первым реагирует иммуноглобулин класса М. Его еще по-другому называют острый. Его уровень повышается в первую неделю болезни, а затем постепенно снижается. Через несколько недель увеличивается количество G.

Наличия высокого титра G говорит о носительстве или о том, что человек когда-то перенес кишечную инфекцию.

Обследование детей на кишечную инфекцию

Забор крови у ребенкаАнализы при кишечной инфекции у детей показывают количество нормальной и патогенной флоры. К ним относится исследование кала и крови.

Исследование кала у ребенка проводится путем бактериологического определения вида возбудителя. Для этого необходимо:

  • сдать кал на анализ в лабораторию;
  • важно собрать кал именно в специальный контейнер;
  • если же у ребенка понос, можно сдать незначительное количество кала;
  • не стоит ставить ребенку клизму перед сбором материала.

Накануне перед забором не стоит давать детям слабительные продукты. Также нужно исключить прием антибиотиков и энтеросорбентов.

Результаты исследования кала у детей могут быть следующие:

  • большое количество лактобактерий;
  • отсутствие или наличие патогенной флоры.

Даже незначительное количество представителей патогенного вида требует антибактериальной терапии.

Анализ крови у детей имеет свои особенности. Они связаны с тем, что нормальные значения для ребенка отличаются от таковых у взрослого человека. Это важно понимать при оценке результатов.

Общий анализ крови при кишечных инфекциях покажет лейкоцитоз, СОЭ выше нормы. Повышенное количество лейкоцитов говорит на воспалительном процессе. Чем больше этот уровень, тем активнее процесс.

Серологическое исследованиеСерологическое исследование у детей также основано на определение иммуноглобулинов.

Анализ на кишечную группу детям назначают в случае:

  • симптомов, характерных для кишечных инфекций;
  • при контакте с больным человеком;
  • для определения возбудителя и назначения адекватной терапии.

Определение вида возбудителя и его чувствительности к антибиотику позволяет проводить успешную терапию заболеваний.

Кишечные инфекции – это та группа микробов, которые требует правильно подобранного лечения и своевременной диагностики. Поэтому важно проводить лабораторные исследования с целью идентификации вида микроба. Правильно подобранное лечение предотвращает развитие серьезных осложнений. Анализ кала и крови на кишечную группу важный и нужный вида диагностики.


otravlenye.ru

Экспресс-тест для выявления ДНК 7 основных возбудителей острой диареи  методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени». Исследование используется  для установления причин острых кишечных инфекций.

Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.

Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов как причин ОКИ варьирует в разных возрастных группах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90 % заболеваний, на долю бактериальных – 10-20 %; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30 %.

Данная тест-система позволяет выявить ДНК следующих возбудителей ОКИ: астровируса, аденовируса, норовируса, ротавируса, сальмонеллы, шигеллы, и кампилобактера.  


Астровирусная инфекция не обладает клиническими особенностями, позволяющими дифференцировать ее от других кишечных инфекций. Вклад астровирусной инфекции в ОКИ в нашей стране составляет около 4%.

Аденовирусные  инфекции отличаются разнообразием клинической симптоматики и ассоциированы с 7 группами аденовирусов человека (A-G), которые объединяют более 50 серотипов. С симптоматикой ОКИ в настоящее время доказательно ассоциированы аденовирусы только группы F. Однако у лиц с острыми респираторными заболеваниями, а часто и клинически здоровых лиц, в образцах фекалий закономерно обнаруживаются аденовирусы других типов, не имеющих связи с патологией желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). В России аденовирусы группы F занимают 4-5-е место по распространенности среди вирусных агентов, вызывающих ОКИ.

Норовирус является одной из частых причин вспышек ОКИ небактериальной этиологии: каждая вторая вспышка ОКИ и 90% вспышек вирусной этиологии ассоциированы с норовирусами. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является «золотым стандартом» в клинической диагностике норовирусных инфекций.

Ротовирус. Заболевания у человека вызывают ротавирусы А, В, и С. Ротавирусы группы А имеют наибольшее эпидемиологическое значение и являются наиболее широко распространенной причиной диарейных заболеваний у детей в возрасте до 5 лет.


Сальмонеллы. Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций.

Сальмонеллез характеризуется значительным полиморфизмом клинического течения с преимущественным поражением ЖКТ, возможной генерализацией и различной степенью выраженности симптомов общей интоксикации и обезвоживания. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.

Шигеллы (Shigella species) – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Клинической особенностью шигеллеза является наличие у  заболевших симптомов поражения толстого кишечника в виде гемоколита со скудным стулом и ложными позывами на дефекацию. 

Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования  микроорганизмов.
о объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. Upsaliensis. Наиболее частыми формами кампилобактериоза являются энтероколит и энтерит. Заболевание кампилобактериозом регистрируется повсеместно как в экономически развитых, так и развивающихся странах в виде спорадических случаев, локальных или крупных вспышек с пищевым и водным путем передачи инфекции.

При возникновении острой диареи всегда нужно максимально быстро найти причину заболевания, чтобы определиться с  тактикой лечения пациента, или решить вопрос о необходимости госпитализации. Диарея, вызванная вирусами, протекает чаще всего благоприятно при своевременной терапии и заканчиваются выздоровлением через 3-7 дней. Неадекватное применение антибиотиков у таких пациентов не только бесполезно, но и приносит вред, задерживая выздоровление. Заболевания,  вызванные кишечными патогенными бактериями, могут потребовать госпитализации и применения антибактериальной терапии. У детей младшего возраста при диарее любого происхождения очень быстро развивается интоксикация и обезвоживание, поэтому их госпитализируют, независимо от причины заболевания в инфекционный стационар.

Быстрый ПЦР-тест на идентификацию основных возбудителей острой диареи в кале  позволяет за один  день подтвердить инфекционную природу диареи. Рекомендуется проводить исследование в первые 3 суток с начала заболевания, у госпитализированных пациентов – в первый день госпитализации. Важно помнить, что острый энтероколит может быть обусловлен и другими инфекциями (например, амебами, лямблиями, иерсиниями, клостридиями, протеями и др.) или неинфекционными причинами (токсинами, ядовитыми веществами, острой непроходимостью кишечника, тромбозом сосудов брыжейки, воспалительными заболеваниями кишечника, острым панкреатитом, аппендицитом, целиакией, острым гепатитом, мальабсорбцией, дивертикулитом).

Контрольный анализ кала после перенесенной инфекции позволяет определить прекращение выделения возбудителя у выздоровевших. 

medlabexpress.perm.ru

Для чего нужен анализ кала

Происхождение кишечных заболеваний делится на бактериальное и вирусное.

Исследование, проведенное учеными, показало, что бактериальные инфекции вызываются патогенными бактериями. Больной страдает:

  • дизентирией;
  • сальмонеллезом;
  • дисбактериозом.

Передача бактериальной инфекции происходит через:

  • грязные руки;
  • немытые овощи;
  • пищевые продукты;
  • воду.

Заболевание, имеющее инфекционный характер, может также вызываться патогенной микрофлорой кишечника. В основном это связано с нарушениями пищеварения, появлением диареи и дисбактериоза. В большинстве случаев все подобные заболевания вызывает кишечная палочка различных штаммов.

К вирусным заболеваниям относится несколько видов инфекции: ротавирусная и энтеровирусная.

Эти болезни могут передаваться и через воздух. Достаточно больному чихнуть или закашляться, как бактерия попадет в воздух, которым дышат все окружающие. Такая передача инфекции возможна из-за того, что вирус поражает желудочный тракт, а также поселяется в дыхательных путях.

Опираясь только на одни симптомы заболевания, трудно точно сказать, кто стал причиной появления болезни. Следовательно, будет просто невозможно назначить правильное лечение. Вот почему таким больным просто необходимо сдать анализы. С их помощью можно будет обнаружить конкретного возбудителя кишечного заболевания.

Микробиологический анализ

Для определения инфекции сдают анализ кала. Выполняется его полное микроскопическое исследование, чтобы обнаружить возбудителя заболевания. Иногда это не удается, так как в кале бактерии иногда почти полностью отсутствуют.

Затем делается посев кала относительно питательной среды. Именно в ней бактерии стремительно размножаются и собираются в большие колонии. Заметим, что кроме вредных бактерий, в кале могут присутствовать также и полезные микроорганизмы.

После окончания роста колонии проведенное ранее микроскопическое исследование делается заново. Проверяются чистые культуры, чтобы идентифицировать истинного возбудителя инфекции.

Когда анализ кала показывает, что в микрофлоре обнаружены сальмонеллы, делается тест на определение уровня чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Для этого скопления вредных бактерий подвергаются действию антибиотиков. Причем берутся самые разные группы, все результаты фиксируются. После определения, какой группой антибиотиков была подавлена бактерия, в отчете указывается степень ее чувствительности к данному лекарству.

Способ ПЦР

В двадцатом веке учеными был разработан оригинальный метод обнаружения кишечной инфекции, так называемая ПЦР, или полимеразная цепная реакция. Она и сегодня обширно применяется для диагностики кишечных заболеваний. Главным положительным фактором этого метода считается его скорость. Он намного быстрее микробиологического анализа, длящегося несколько суток.

С помощью ПЦР в имеющемся, даже в малом количестве, биологическом материале, можно обнаружить ДНК возбудителя болезни. Таким способом можно исследовать и любую жидкость.

ПЦР подразделяется на две группы:

  • качественные;
  • количественные.

Иначе говоря, можно определить присутствие возбудителя и его количество в определенной биологической среде.

С помощью ПЦР определяют возбудителей инфекции самого разного происхождения. К ним относятся:

  • шигеллы;
  • сальмонеллы;
  • иерсинии;
  • палочки;
  • ротавирусы;
  • энтеровирусы.

Анализ крови

Если микробиологическое исследование не дало положительного результата, дополнительно делается анализ крови. Он назначается врачом для определения антител, когда заболевание имеет затяжной характер или когда больной слишком поздно обратился за помощью.

Для сдачи крови нужно за три дня до проведения анализа прекратить курить, не употреблять спиртные напитки и не подвергать себя тяжелым физическим нагрузкам. Кровь необходимо сдавать только натощак.

Диарея

Если у человека долгое время не проходит диарея, можно говорить о наличии какого-либо серьезного заболевания. Диарея очень опасна. Она может стать причиной обезвоживания организма, от нее страдает микрофлора кишечника. Из-за поноса в кровь поступает очень мало полезных микроэлементов.

Чтобы обнаружить причину появления диареи, необходимо пройти обследование. Какие анализы потребуются? Прежде всего, делается каловый сбор для определения причины дисбактериоза. Выявляется количество следующих микроорганизмов:

  • лактобактерий;
  • бифидобактерий;
  • палочек;
  • энтеробактерий;
  • стафилококков;
  • клостридий;
  • грибков;
  • протей.

При уменьшении концентрации любого из этих микробов нарушается баланс в кишечнике, появляется диарея.

Кроме этого анализа, большую пользу принесет специализированный анализ, который поможет выявить кишечную инфекцию. Ведь причиной нарушения баланса могут стать: дизентерия, ротавирусная инфекция, сальмонеллез, иерсиниоз.

Затем сдается кал для обнаружения лямблий и глистов. Этот анализ очень важен при обследовании детей и тех, кто общается с домашними животными. Касается это и любителей рыбной пищи. Исследуется также кровь для обнаружения нескольких видов антител:

  • токсокара;
  • трихинеллы;
  • эхинококка,
  • описторхоза.

Присутствие в организме глистов вызывает понос. Человек ощущает сильную тошноту, у него рвота. При большом количестве глистов воспаляется кишечник, начинается токсикоз.

Диарея может также появиться из-за ряда других заболеваний: гепатита, аппендицита, стресса, нервного срыва.

У человека нарушается работа кишечника, как следствие появляется понос. Чтобы исключить все перечисленные заболевания, нужно сдать кал для обнаружения гепатита А. Анализ крови может показать, болен ли человек другими видами гепатита, например, С.

Когда начинает болеть низ живота или правый бок, можно говорить об аппендиците. С такой болью нужно немедленно обратиться к врачу.

Когда у больного хроническая диарея, его фекалии приобретают маслянистый вид, в них видны непереварившиеся кусочки пищи. Такие симптомы подразумевают недостаточность пищеварения, они говорят о нарушении работы поджелудочной железы. В этом случае необходимо сделать копрологию. Она поможет установить точный диагноз. Обычно такие признаки говорят о начавшемся панкреатите.

Причину появления диареи поможет установить анализ крови, сданный для биохимического обследования. В лаборатории изучаются находящиеся в крови элементы печени. В случае печеночной недостаточности у человека начинаются тошнота, желтый понос, рвота.

Сдав такой анализ, можно быстро узнать о появлении заболевания и немедленно начать лечение.

Работа кишечника часто нарушается из-за сбоев в работе других органов:

  • печени;
  • желчного пузыря;
  • поджелудочной железы;
  • селезенки;
  • ЖКТ.

Чтобы обнаружить такие аномалии, необходимо сделать УЗИ. Оно покажет, какой именно орган работает неправильно. Врачу намного проще будет поставить правильный диагноз.

Если, сдав все вышеперечисленные анализы, правильный диагноз установить не удалось, можно попробовать проверить, как работает щитовидная железа. Когда увеличивается количество гормонов и наступает гипертиреоз, возможно появление длительной диареи.

Причиной появления поноса могут стать и нервные расстройства, вызывающие признаки раздраженного кишечника.

Обнаружение кишечной группы

В нашем кишечнике находится огромное количество самых разных бактерий. Каждый вид оказывает положительное воздействие на микрофлору.

Часть этих микроорганизмов совершенно безопасна, а часть относится к группе условно-патогенных. Иначе говоря, если для них создать соответствующую среду, к примеру, ослабление иммунитета или появление дисбактериоза, эти бактерии могут превратиться во «вредные». В результате возможно появление серьезных заболеваний.

Существую также микроорганизмы, которые уже с самого начала считаются патогенными. Когда все нормально, их невозможно обнаружить в организме человека. Когда они попадают в кишечник, у человека начинается кишечная инфекция, возможно, начало формирования бактерионосительства. Для обнаружения таких возбудителей больному необходимо сдать анализ кала, чтобы найти следы кишечной группы.

Как проводится исследование

Цель такого анализа одна – обнаружить наличие опасных бактерий. Для этого проводится тщательное изучение кала.

Сначала его пристально изучают под большим увеличением. Микроскоп показывает присутствие вредных веществ. Даже их маленькое количество все равно будет заметно под микроскопом.

Затем делается посев кала. Бактерии погружаются в питательные среды. Численность микроорганизмов начинает быстро увеличиваться. Когда колонии достигнут больших размеров, каждый образец тщательно изучается, чтобы точно определить какой именно микроорганизм находится в данном образце.

В случае обнаружения вредных бактерий, например, сальмонелл, проводится специальный тест для определения чувствительности микробов к антибиотикам.

Выросшие колонии подвергают воздействию различных групп антибиотиков.

Затем изучают их реакцию. Если микробы погибают под действием конкретного антибиотика, следовательно, возбудитель инфекции имеет к нему повышенную чувствительность.

Результаты данного анализа на специальном бланке вручаются клиенту. Кроме того, в анализе перечисляются все виды микробов, которые присутствовали в кале.

Не стоит сразу отчаиваться, увидев большой список микроорганизмов, обнаруженных в кале. Возможно, большая часть из них имеет положительный характер. Расшифровать такой анализ довольно сложно, это может сделать только врач.

Но если в бланке стоит плюс около термина Salmonella, можно сразу понять, кто виноват в появлении болезни. Но окончательный диагноз начавшегося дисбактериоза пусть лучше поставит лечащий врач.

Кому необходимо сдавать анализы

Безусловно, такие анализы назначаются, прежде всего, лицам с подозрением на присутствие кишечной инфекции. Иногда проводится даже микроскопия рвотных масс. В некоторых случаях изучаются смывы тарелок, если подозревается, что источник заражения находится в пище. Но более точные данные дает анализ кала, так как в нем содержатся сведения обо всей микрофлоре кишечника.

Ценность анализа, с помощью которого обнаруживается кишечная группа, заключается в возможности определить, какие именно препараты окажут больному максимальную помощь. Как следствие, терапевтические процедуры будут иметь целенаправленный характер и приведут к быстрому выздоровлению.

К сожалению, результаты посева не получаются мгновенно. Придется ждать почти неделю.

Надо сказать, что такие анализы сдают не только больные люди. Обязательно их следует сдавать работающим в медицинских учреждениях, а также постоянно контактирующим с пищей. Ведь в их организме могут находиться патогенные микробы. Из-за них может появиться заражение, и, как следствие, заболевание. Такое обследование все вышеперечисленные категории обязаны проходить ежегодно.

Как сдается анализ для обнаружения кишечной группы

Собирается и доставляется кал в лабораторию обычным способом. Единственным отличием будет посуда, в которой он будет содержаться. Она должна быть стерильна. Герметичную банку необходимо хорошо прокипятить. В аптеках также продаются особые герметичные контейнеры. Они не дадут возможности посторонним микробам проникнуть внутрь. Исследование покажет очень точный и надежный результат.

Заключение

Для того чтобы дети и взрослые не подвергались заражению инфекционными заболеваниями, нужно обязательно соблюдать гигиену. Всегда, прежде чем сесть за стол, нужно хорошо вымыть руки.

Только анализ, сданный для обнаружения кишечных инфекций, может помочь врачу поставить точный диагноз и назначить правильное лечение. Всегда помните об этом. Не отказывайтесь от сдачи анализа, без него диагноз может быть ошибочным, а лечение – бесполезным.

proinfekcii.ru

Комплексное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет выявить генетический материал наиболее вероятных возбудителей острых кишечных инфекций в кале и установить этиологию заболевания.

Синонимы русские

ОКИ, ПЦР (кал).

Синонимы английские

Acute intestinal infection screening; Bacterial and viral diarrhea screening, PCR, fecal samples.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Кал.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
  • Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.

Согласно официальной статистике, в России до 65-67% заболеваний этой группы составляют ОКИ неуточненной этиологии. Если возбудитель инфекции неизвестен, эффективность противоэпидемических мероприятий ограничивается. Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов варьируется в разных возрастах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90% заболеваний, на долю бактериальных – 10-20%; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30%.

Shigella species и Esherichia coli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев «бактериологически неподтвержденной дизентерии», особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.

Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций. Сальмонеллез может протекать в форме острой кишечной инфекции, тяжелой генерализированной инфекции или бессимптомного носительства. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.

Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования (которое требуется в ходе анализа) микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis).

В соответствии с данными зарубежной литературы, норовирус – наиболее частый возбудитель вспышек ОКИ небактериальной этиологии. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является «золотым стандартом» в клинической диагностике норовирусных инфекций.

Несмотря на несколько меньшую в сравнении с рота- и норовирусами распространенность, астровирусы составляют значительный пласт кишечных инфекций, у трети пациентов протекающий с явлениями колита. Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей, а ДНК-содержащий аденовирус F (серотипы 40 и 41) нередко вызывает вспышки гастроэнтеритов у детей младшего возраста.

Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральными методами благодаря быстрому получению результатов, высокой специфичности и чувствительности исследования. Данный анализ позволяет со 100-процентной точностью определить возбудителя кишечного заболевания, а быстрая диагностика острых кишечных инфекций помогает избежать лишних процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.

Для чего используется исследование?

  • Для установления этиологического фактора острой кишечной инфекции;
  • для дифференциальной диагностики причин острого гастроэнтероколита (воспаления ЖКТ).

Когда назначается исследование?

  • При симптомах острого гастроэнтерита, вероятно, инфекционной этиологии (жидкий частый стул, рвота, лихорадка, боли в животе);
  • при одновременном или последовательном развитии ОКИ у нескольких членов семьи, у детей в детском учреждении или пациентов в стационаре;
  • при подозрении на развитие внутрибольничной кишечной инфекции (при обострении симптомов энтероколита у пациента, находящегося на лечении по поводу ОКИ).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

  • присутствие ДНК или РНК возбудителя ОКИ; этиология в зависимости от выявленного вида возбудителя (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus).

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие инфицирования Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus.

Что может влиять на результат?

Факторы, искажающие результат:

  • длительное хранение материала до его поступления в лабораторию;
  • замораживание материала или его термическая обработка;
  • несоблюдение правил взятия биоматериала и его загрязнение.

Важные замечания

  • Рекомендуется проводить исследование в первые 3 суток с начала заболевания, у госпитализированных пациентов – в первый день госпитализации.
  • Важно помнить, что острый энтероколит может быть обусловлен и другими инфекциями (например, амебами, лямблиями, иерсиниями, клостридиями, протеями и др.) или неинфекционными причинами (токсинами, ядовитыми веществами, острой непроходимостью кишечника, тромбозом сосудов брыжейки, воспалительными заболеваниями кишечника, острым панкреатитом, аппендицитом, целиакией, острым гепатитом, мальабсорбцией, дивертикулитом).

Также рекомендуется

  • Yersinia pseudotuberculosis, ДНК [ПЦР]
  • anti-Shigella flexneri 1-5, anti-Shigella sonnei
  • Посев кала на патогенную флору (диз. группа и тифо-паратифозная группа)
  • Посев кала на условно-патогенную флору с определением чувствительности к антибиотикам
  • Анализ кала на цисты простейших
  • Копрограмма
  • Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
  • Лейкоцитарная формула
  • Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гастроэнтеролог, терапевт, педиатр.

Литература

  • Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М.: МИА, 2005. – 736 с.
  • Gómez-Duarte O., Bai J., Newel E. Detection of E. coli, Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae, and Campylobacter spp. enteropathogens by Three-reaction Multiplex PCR. Diagn Microbiol Infect Dis. 2009 January; 63(1): 1-9. PMCID: PMC2701628.

helix.ru

 

      Несмотря на постоянные усилия, предпринимаемые для улучшения санитарно-эпидемиологической обстановки (повышение качества продуктов питания, питьевой воды, ужесточение санитарно-гигиенических требований), гастроэнтериты вирусной, бактериальной и протозойной этиологии по-прежнему широко распространены во всем мире. Они являются наиболее распространенной причиной смерти детей в возрасте до 5 лет (по оценкам, примерно 2 млн. случаев ежегодно).
      Вплоть до последнего времени в Российской Федерации методами лабораторной диагностики выявляли в основном бактериальных возбудителей «традиционных» инфекционных заболеваний: дизентерии, сальмонеллеза, холеры и брюшного тифа, а также некоторых протозойных инфекций (лямблиоз). Это связано как с распространенностью возбудителей, так и с устоявшейся лабораторной практикой, основанной главным образом на микробиологических методах диагностики. Что касается вирусных инфекций, их лабораторная диагностика была налажена только по отношению к вирусным гепатитам. Отсутствие в широкой лабораторной практике арсенала методов выявления более широкого круга инфекционных агентов, в первую очередь вирусов, приводило и приводит до сих пор к постановке большого числа диагнозов «Острая кишечная инфекция неустановленной этиологии». Эта графа, как правило, является преобладающей в статистической отчетности.
      В России среди установленных возбудителей острых кишечных инфекций (ОКИ) преобладают инфекционные агенты бактериальной природы (80–85%), тогда как на вирусы и простейшие приходится по 5¬–10%. Эта картина зеркально противоположна по отношению к статистике, характерной для стран Западной Европы и США.
      В последние годы, с внедрением в практику отечественных лабораторий новых тестов, основанных на определении специфических антигенов (иммунохимические методы) и специфических геномных последовательностей (ПЦР), появилась возможность точной идентификации возбудителей ОКИ небактериальной природы. В результате, значительно чаще идентифицируются вирусные инфекции, доля которых в статистических показателях заболеваемости острыми кишечными инфекциями растет [1, 4]. Так, многочисленные вспышки гастроэнтеритов, произошедшие в первой половине 2010 года в ряде областей РФ, были вызваны, помимо традиционно определяемых сальмонелл, ротавирусом и норовирусом [5].
      Как эффективность мер, направленных на снижение распространенности инфекционных гастроэнтеритов, так и правильный выбор лечебных мероприятий напрямую зависят от точного и своевременного установления агента, вызвавшего заболевание. Клиническая симптоматика ОКИ, вызванных разными инфекционными агентами, во многом сходна. Основным симптомом всех ОКИ является диарея, различная по характеру и интенсивности. И диарея, и другие симптомы — тошнота, рвота, боль в животе, симптомы интоксикации — не являются специфическими. Данные анамнеза, как правило, также не указывают на природу инфекционного агента. Таким образом, диагностика в основном обеспечивается лабораторными методами.
      Очень важен также фактор времени, особенно при возникновении инфекционной вспышки. Чем быстрее выявлен этиологический агент, ставший причиной вспышки, тем раньше и более эффективно производятся дезинфекция и противоэпидемические мероприятия. Это, в свою очередь, позволяет значительно сократить экономические потери: стоимость материалов и работы при проведении дезинфекции, оплата больничных листов и сверхурочных работ, упущенная выгода и т.д. Так, потери, причиненные вспышкой норовирусной инфекции в одном из госпиталей в США, были оценены более чем в 650 тысяч долларов [19]. Показано, что, если норовирус, как причина вспышки, идентифицируется на день раньше, ее продолжительность сокращается на 5¬¬–7 дней, с соответствующим снижением числа заболевших и экономического ущерба [24].
      В связи с этим применение надежных и быстрых методов диагностики, в особенности экспресс-тестов, предназначенных для использования не только в лаборатории, но и непосредственно в очаге заболевания, приобретает первостепенное значение.
Использование традиционных серологических тестов для диагностики ОКИ является малоэффективным. Антитела в крови, выявляемые с помощью этих тестов, появляются слишком поздно, когда острая фаза заболевания уже завершилась или наступило выздоровление. Для диагностики значительно более важными являются методы, основанные на непосредственном определении антигенов возбудителей в кале. Как правило, эти методы позволяют идентифицировать инфекционный агент одновременно с появлением симптомов заболевания.
      Диагностические наборы для определения антигенов возбудителей ОКИ на основе широко распространенного метода иммуноферментного анализа (ИФА) обладают высокой чувствительностью и специфичностью. Для проведения анализа не обязательно наличие в образце интактных микроорганизмов или других морфологически целостных структур, необходимых для эффективной микроскопии. Методики анализа стандартны, просты и удобны, легко поддаются автоматизации и экономически оправданы, особенно при значительном потоке исследований. В то же время для проведения ИФА необходимо специальное, хотя и широко распространенное, оборудование, что предполагает передачу образцов для исследования в лабораторию. Диагностика в полевых условиях и «у постели больного» с помощью наборов ИФА не предусматривается, хотя в принципе возможна.
      Альтернативой ИФА являются использование быстрых иммунохроматографических тестов. Постоянное совершенствование технологии привело к тому, что их чувствительность и специфичность близки к соответствующим показателям наборов для ИФА. При этом экспресс-тесты выполняются быстро (как правило, не более, чем за 15 минут), проведение анализа и интерпретация результата очень просты, для проведения анализа не требуется специальное оборудование. Очень важно, что анализ может быть проведен непосредственно в инфекционном очаге, что позволяет избежать потери времени на транспортировку образца в лабораторию.

 

 

1 – образец, содержащий аналит; 2 – конъюгат; 3,4 – иммобилизованные антитела (тестовая и контрольная полосы); 5 – подушечка для образца; 6 – подушечка для конъюгата; 7 – мембрана; 8 – подушечка для абсорбции реагентов; 9 – подложка для мембраны; 10 – тестовая полоса: положительный результат; 11 – контрольная полоса: достоверный результат теста.

       Схема работы иммунохроматографического экспресс-теста (на примере тестов производства компании R-Biopharm (ФРГ) приведена на Рис. 1. Исследуемый образец суспендируют в специальном буферном растворе, твердым частицам дают осесть в течение нескольких минут. Надосадочную жидкость вносят в специальное окошко тест-кассеты, после чего она смешивается в определенной пропорции с конъюгатом — специфичными к определяемому антигену антителами, связанными с окрашенными частицами латекса. Частицы образовавшегося комплекса «антиген–конъюгат» двигаются с током жидкости вдоль нитроцеллюлозной мембраны, в определенном месте которой (тестовой зоне) иммобилизованы другие антитела, также специфичные к антигену. Молекулы этих антител связывают частицы движущегося комплекса, в результате чего в тестовой зоне концентрируются окрашенные частицы и образуется видимая глазом полоса, свидетельствующая о наличии определяемого возбудителя в образце. Кроме того, проявляется контрольная полоса, свидетельствующая о том, что миграция образца вдоль мембраны произошла нормально, следовательно, анализ выполнен правильно и его результат достоверен. На мембране комбинированных экспресс-тестов, предназначенных для определения нескольких возбудителей одновременно, антитела разной специфичности присутствуют в нескольких тестовых зонах, соответственно в результате анализа может окраситься несколько тестовых полос, обычно разного цвета, соответствующих присутствующему в образце возбудителю (Рис. 2).

 

 

 

Формат теста: вверху – тест-кассета, внизу – тест-полоска.
1 – участок внесения образца.
2 – участок расположения конъюгата.
3 – реакционная зона; слева направо – контрольная полоса (С); тестовая полоса, свидетельствующая о наличии в образце веротоксина (T2); тестовая полоса, свидетельствующая о наличии антигенов штамма O157 (T1).
4 – участок абсорбции реагентов (закрыт пленкой с названием теста).

      Вирусные инфекции
Ротавирус
      Ротавирусная инфекция является наиболее распространенной причиной вирусных ОКИ у детей. С ней связано примерно 40% всех госпитализаций, вызванных диареей у детей [27, 28]. Считается, что в возрасте до 5 лет почти каждый ребенок имеет контакт с вирусом (может быть, бессимптомный), каждый пятый обращается к врачу, 1 из 65 нуждается в госпитализации, 1 из 293 умирает. По оценкам, ежегодно в мире от гастроэнтеритов, вызванных ротавирусной инфекцией, умирает 500–600 тысяч человек [22, 27]. Распространенность инфекции за последние 20 лет возрастает, а смертность и число госпитализаций хоть и снижаются, но намного медленнее, чем при ОКИ, вызванных бактериями и паразитами. Возможными причинами этого являются невысокая эффективность противоэпидемических мероприятий и отсутствие своевременной этиотропной терапии. Кроме того, из-за сильной рвоты, обычной при этом заболевании, не всегда удается вовремя и адекватно восполнять потери воды.
      Основной путь заражения – фекально-оральный. Ротавирусы выделяются с фекалиями больных в огромных количествах (миллиарды частиц в миллиграмме), в то время как доза, равная нескольким тысячам частиц, может быть достаточна для заражения. Вирус устойчив во внешней среде, может долго сохраняться в холодильнике (в продуктах питания), обнаруживается в водоемах. Для ротавирусной инфекции характерна заболеваемость в виде эпидемических вспышек. Часто возникают вспышки внутрибольничной инфекции.
      Вирус поражает эпителиальные клетки слизистой оболочки тонкого кишечника. Вирусный энтеротоксин (белок NSP4) вызывает нарушение реабсорбции воды. Кроме того, гибель эпителиальных клеток, секретирующих лактазу, приводит к недостаточности этого фермента, которая может продолжаться в течение нескольких недель после выздоровления и быть причиной непереносимости молока.
      Учитывая высокую контагиозность ротавируса, его распространенность и риск развития внутрибольничных осложнений, важнейшей задачей является быстрая и эффективная диагностика ротавирусной инфекции. Решение этой задачи обеспечивает широкое использование иммунохимических диагностических препаратов: наборов для ИФА и экспресс-тестов. Так, показано, что быстрый тест RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus (R-Biopharm) имеет чувствительность 75% (для выявления ротавируса) по отношению к ПЦР, что позволяет с успехом применять его при вспышках инфекции [32].

Аденовирус
      Аденовирус — вторая по частоте после ротавируса причина ОКИ, встречающихся у детей. Поражение желудочно-кишечного тракта вызывают аденовирусы только одного вида – группы F (или типов 40/41), однако при инфекции другими аденовирусами также могут наблюдаться вторичные симптомы со стороны ЖКТ. Антигены аденовируса выявляют в образцах кала у 4–15% детей с гастроэнтеритом. Так же, как и при поражении ротавирусом, возникают эпидемические вспышки, в том числе внутрибольничные инфекции.
      Для экспресс-диагностики аденовирусной инфекции при гастроэнтеритах обычно используют двойной тест (одновременное выявление рота- и аденовируса). Примером может служить экспресс-тест RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus [32].

Норовирус
      Норовирус (старое название — вирус Норфолк, по названию города в штате Огайо, где он впервые был идентифицирован) является одной из главных причин ОКИ во всем мире — как в развивающихся, так и в развитых странах [8], в том числе и в России [2, 6]. По оценкам, в США 80–90% случаев вспышек эпидемических гастроэнтеритов вызывается норовирусом [10, 13].
      Контагиозность вируса чрезвычайно высока, что связано с его крайне низкой инфекционной дозой, а также высокой устойчивостью к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды. Основным путем распространения являются бытовые контакты, а также заражение при вдыхании аэрозолей, содержащих частицы рвотных масс больного. Вспышки заболевания возникают при санитарных нарушениях, в частности, при попадании содержимого канализации в водопровод. Наиболее часто вспышки происходят в локализованных группах: в школах, детских садах, летних лагерях, больницах, лечебно-оздоровительных учреждениях, домах престарелых, на морских судах и т.д.
      Вызванный норовирусом гастроэнтерит протекает сравнительно легко и обычно не требует терапевтического вмешательства; исключение составляют больные с ослабленной иммунной системой. Тем не менее, своевременное определение этиологического фактора имеет важное значение, позволяя своевременно проводить санитарно-гигиенические и противоэпидемические мероприятия и тем самым значительно сократить нанесенный вспышкой экономический ущерб. Для выявления норовируса в кале больных широко используется метод ПЦР, обладающий высокой чувствительностью. Этот метод пригоден и для диагностики спорадических случаев, и для инфекционных вспышек, а также используется как метод подтверждения. Однако, учитывая чрезвычайную важность фактора времени при выяснении причины инфекционной вспышки, необходимо иметь возможность диагностики на месте, без отправления образцов в специализированную лабораторию. Диагностические наборы, основанные на методе ИФА, а также иммунохроматографические экспресс-тесты, хотя несколько уступают в чувствительности ПЦР-анализу, тем не менее обеспечивают быструю и надежную диагностику инфекции в эпидемическом очаге [12, 21]. Набор для ИФА RIDASCREEN Norovirus (R-Biopharm) был первым в мире набором, при помощи которого определялись вирусы, принадлежащие к обеим опасным для человека геногруппам GI и GII. При специфичности близкой к 100%, чувствительность современных наборов третьего поколения составляет 80%. Это позволяет, исследуя 2–3 образца, полученных во время вспышки, определить ее норовирусную этиологию с эффективностью, практически не уступающей ПЦР [11]. Экспресс-тест RIDA QUICK Norovirus (R-Biopharm) – первый в мире быстрый тест, предложенный для диагностики норовирусной инфекции, — имеет сходные с ИФА показатели чувствительности и специфичности. Время, необходимое для проведения анализа, составляет 20 минут.

Астровирус
      По оценкам зарубежных ученых, в развитых странах астровирусная инфекция является причиной до 10% случаев спорадических ОКИ и до 15% инфекционных вспышек у детей в возрасте до 7 лет [23, 25]. Астровирусы — небольшие, лишенные оболочки частицы (28–32 нм) икосаэдральной формы, содержащие одноцепочечную РНК.
      Заболевание обычно протекает в легкой форме. Более тяжелые проявления встречаются при иммунодефицитных состояниях.
В течение значительного времени астровирусы выявляли методом электронной микроскопии. При этом ввиду того, что далеко не все вирусы имеют характерную звездчатую форму, заболеваемость ОКИ астровирусной этиологии была значительно занижена. Применение иммунохимических методов анализа, таких, как ИФА, позволило более реально оценить вклад астровирусов в заболеваемость ОКИ.

       Бактериальные инфекции
Кампилобактер
      Наряду с сальмонеллами, инфекция бактерии рода Campylobacter, главным образом C.jejuni и C.coli, являются одной из основных причин ОКИ бактериального происхождения. Эти бактерии широко распространены в кишечнике домашних животных и птиц, они часто являются симбионтами организма хозяина. Человек заражается через мясопродукты, фекально-оральным путем, при контакте с зараженным животным. Возможно также заражение через воду, взятую из инфицированных водоемов.
      Кампилобактериоз распространен повсеместно и, по разным оценкам, составляет от 5 до 14% всех ОКИ. Чаще всего заболевание развивается у детей в возрасте до 7 лет. Пик заболеваемости приходится на летние месяцы. Кампилобактериоз — частая причина «диареи путешественников».
      Помимо классических симптомов ОКИ (диарея и связанные с ней обезвоживание и нарушение водно-электролитного баланса, боль в животе, общая слабость) кампилобактериоз часто сопровождается повышением температуры до 39–40° С, головной болью и болью в мышцах и суставах. Терапия обычно сводится к восстановлению водно-электролитного баланса. В тяжелых случаях применяют антибиотики.
      Редко встречающееся инфицирование бактериями Campylobacter fetus может привести к серьезным системным осложнениям: эндокардиту, септическим артриту и флебиту, менингиту, синдрому Гийена-Барре.
      Для лабораторной диагностики кампилобактериоза применяются традиционный микробиологический метод, считающийся «золотым стандартом». Анализ выполняется в специализированной лаборатории квалифицированным персоналом. Бактерии прихотливы к условиям культивирования; кроме того, требуется подавление контаминирующей микрофлоры. Это предъявляет высокие требования к взятию и транспортировке исследуемых образцов.
      В последние годы все большее распространение получили тест-системы для ИФА, предназначенные для прямого выявления антигенов возбудителей в фекалиях. Чувствительность и специфичность лучших из них сопоставима с показателями микробиологического анализа. Так, при проведении испытаний ИФА-наборов RIDASCREEN Campylobacter (R-Biopharm), чувствительность составила 100% (14 образцов из 14) , а специфичность — 99,6% (244 образцов из 245). При этом время проведения анализа значительно меньше, а требования к качеству образца менее строгие, чем в случае микробиологического исследования.

Геморрагические штаммы Escherichia coli
      В отличие от большинства штаммов E.coli, персистирующих в кишечнике человека и не вызывающих каких-либо симптомов патологии, геморрагические штаммы продуцируют шига-подобные токсины (веротоксины) и способны вызывать тяжелые заболевания как кишечника, так и других органов. Большая часть инфекционных вспышек вызывается штаммами, принадлежащими к серотипу E.coli O157:H7.
      В США, где вспышки заболеваний, вызванных геморрагическими E.coli, регистрируются с 1983 г., ежегодно возникает более 70 000 новых случаев, более 2 000 из которых требуют госпитализации.
      Большинство случаев инфекции протекает сравнительно легко, проявляется в основном водянистой диареей и завершается самоизлечением. Однако у части больных развивается геморрагический колит (ГК) с кровавой диареей, а у 5–10% больных ГК –тромботическая тромбоцитопеническая пурпура или гемолитический уремический синдром (ГУС) – тяжелое, угрожающее жизни состояние. Тяжелые осложнения наиболее часты у детей, лиц пожилого возраста и лиц с ослабленным иммунитетом.
      Природным носителем бактерий штамма O157:H7 является крупный рогатый скот, у которого инфекция протекает бессимптомно. Основной путь передачи – через продукты питания (мясо, молоко, овощи, употребляемые в пищу без термической обработки) и зараженную воду. Также возможна передача инфекции контактным путем, в том числе и от инфицированного животного. Бактерии способны долго (до года) сохраняться в унавоженной почве и в воде, особенно при невысокой температуре. Более того, они способны выживать и размножаться внутри широко распространенного в почве простейшего Acanthamoeba polyphaga. Инфекционная доза очень невелика (до 50 КОЕ). Возможно, это объясняется повышенной устойчивостью бактерий к низким значениям pH, позволяющим им успешно преодолевать кислую среду желудка.
      Микробиологическое выявление бактерий серотипа O157 требует применения селективных питательных сред, основанных на некоторых особенностях метаболизма, свойственных этим бактериям (задержка утилизации D-сорбитола и отсутствие экспрессии β-глюкуронидазы). Однако, как показывает практика, для более надежной диагностики, особенно при тяжелых случаях инфекции, необходимо определение в фекалиях патогенных факторов — веротоксинов. Для этого применяются как методы молекулярной диагностики, так и более простые иммунохимические методы (ИФА и иммунохроматография). Наибольшая чувствительность этих анализов достигается, если бактерии, содержащиеся в образце, предварительно подращивают в течение ночи в специальной питательной mTSB-среде, содержащей митомицин С. Культивирование в этой среде способствует усиленной продукции веротоксинов.
      ИФА-набор RIDASCREEN Verotoxin (R-Biopharm) имеет достаточно высокую чувствительность (96%) и специфичность (99%) по отношению к культуральному цитотоксическому тесту [9]. Эти наборы были успешно использованы для выявления причин ГУС, возникшего у детей при вспышке ОКИ в г. Омске [3]. Экспресс-тест RIDA QUICK Verotoxin/O157 Combi (R-Biopharm) является двухпараметровым и позволяет раздельно определять как антигены серотипа O157, так и молекулы веротоксинов I и II , что увеличивает чувствительность анализа. Обнаружение бактерий серотипа O157 особенно важно в связи с расширением циркуляции штаммов, способных усваивать сорбитол, что сильно затрудняет микробиологическую диагностику [20, 26]. Есть основания полагать, что у больных, инфицированных бактериями именно этих штаммов, чаще всего развивается ГУС [7, 29].

Clostridium difficile
      Clostridium difficile – анаэробные грамположительные бактерии, способные к спорообразованию как во внешней среде, так и при неблагоприятных условиях в кишечнике. Большинство штаммов C.difficile не вызывает у человека каких-либо симптомов, однако ряд штаммов, содержащих ген PaLoc, способны к продукции токсинов A (энтеротоксин) и B (цитотоксин). Молекулы токсинов поражают клетки эпителия кишечника и межклеточные контакты, вызывая воспаление кишечной стенки.
      Диарея, вызываемая токсинами C.difficile, часто возникает при терапии антибиотиками. При этом нарушение баланса микрофлоры в кишечнике приводит к активному размножению клостридий, малочувствительных к воздействию широко распространенных антибиотиков, продукции ими токсинов и развитию заболевания. Это часто происходит у больных, находящихся на стационарном лечении. C.difficile — одна из главных причин внутрибольничных гастроэнтеритов в развитых странах. В ряде случаев развивается псевдомембранозный колит – острое заболевание с тяжелым течением.
      Основные пути передачи — фекально-оральный и контактный. Споры могут сохраняться на открытых поверхностях в течение 5 месяцев.
      Число ОКИ, вызванных C.difficile, в последние годы имеет устойчивую тенденцию к росту. Это связано как с появлением штаммов, устойчивых к воздействию этиотропных лекарственных препаратов (фторхинолонов), так и расширяющейся циркуляцией нового штамма NAP1/BI/027, имеющего более высокую вирулентность [18].
      Бактериологические методы определения C.difficile для диагностики ОКИ практического значения не имеют, так как они не позволяют выявить токсин-продуцирующие штаммы. «Золотым стандартом» диагностики является цитотоксический культуральный метод, с применением антител, специфичных к токсинам A и B, для подтверждения в реакции нейтрализации. Другой вариант культурального метода —выращивание бактерий на специальных средах, стимулирующих продукцию токсинов, с дальнейшим определением токсинов методами ИФА или ПЦР. Оба теста проводятся в специализированных лабораториях, для их выполнения необходим высококвалифицированный персонал, время анализа составляет до 48 часов.
      Применение иммуноферментных тест-систем, предназначенных для суммарного выявления токсинов A и B в образцах кала, позволяет получить результат в течение 2–3 часов. Чувствительность таких наборов по отношению к культуральным тестам составляет более 90%, тогда как специфичность близка к 100% [30]. Оптимальной является следующая схема диагностики: анализ проводится методом ИФА с последующим тестированием отрицательно прореагировавших образцов культуральными методами.

      Протозойные инфекции
Лямблии
      Жгутиковое простейшее Giardia lamblia — самый распространенный протозойный возбудитель ОКИ, являющийся причиной примерно 200 миллионов случаев заболевания в год по всему миру, большей частью в развивающихся странах. Вызванный лямблиями гастроэнтерит большей частью поражает детей.
      В жизненном цикле лямблии существуют в трофозоитной и цистной форме. Трофозоиты размножаются в проксимальных отделах тонкого кишечника. С калом выводятся как цисты (до 200 000 в грамме), так и трофозоиты. Во внешней среде выживают только цисты, причем они сохраняют жизнеспособность в течение месяцев. Инфицирование цистами происходит через зараженную воду и продукты питания, а также фекально-оральным путем. Возможен половой путь передачи инфекции.
      Лямблиоз проявляется типичными симптомами ОКИ. Заболевание может длиться до 6 недель и переходить в хроническую форму, чреватую серьезными нарушениями пищеварения и всасывания в кишечнике и задержкой развития у детей [15].

Криптоспоридии
      Простейшие рода Cryptosporidium — внутриклеточные паразиты, обитающие в организме человека и многих млекопитающих. 8 видов криптоспоридиев вызывают заболевания у человека, основная часть которых приходится на C.hominis и C.parvum. Заболеваемость составляет примерно 3% населения в развитых и 6% — в развивающихся странах. Чаще болеют дети (соответственно около 7% и 12%). Криптоспоридиоз также является распространенной оппортунистической инфекцией у больных синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД).
      Криптоспоридии паразитируют на эпителиальных клетках тонкого кишечника, чаще всего в его дистальной части, вызывая атрофию ворсинок. Жизненный цикл включает половое размножение и формирование цист, выделяющихся из кишечника во внешнюю среду. Основной путь передачи инфекции — через зараженную цистами воду. Цисты очень устойчивы во внешней среде, в том числе и к действию многих дезинфицирующих реагентов, в частности к хлорированию водопроводной воды, бассейнов и т.д. [16, 17]. Возможны также фекально-оральный путь и передача инфекции человеку от зараженного животного.
      Криптоспоридии вызывают диарею, продолжающуюся до 2 недель и обычно завершающуюся выздоровлением без специального лечения. Однако при иммунодефицитных состояниях, в частности, у больных СПИД, заболевание может длиться несколько месяцев. Диарея у этих больных длительная и обильная, похожа на симптом холеры и приводит к обезвоживанию, требующему терапевтической коррекции. Возникают также симптомы поражения других отделов ЖКТ (пищевод, желудок, желчевыводящие пути), поджелудочной железы и органов дыхания.

Entamoeba histolytica
      В настоящее время E.histolytica считается единственным представителем рода Entamoeba, вызывающим заболевание у человека; патогенность очень близких к ней E.dispar и E.moshkovskii находится под вопросом. В развитых странах E.histolytica вызывает ОКИ, заболеваемость составляет 1—4% населения. Однако в развивающихся, особенно южных, странах заболеваемость носит массовый характер (70–90% населения в эндемичных регионах) и болезнь часто протекает в тяжелой форме. По разным оценкам, от амёбиаза ежегодно умирает от 40 000 до 100 000 человек [14, 33].
      В норме энтамеба колонизирует дистальный отдел тонкого и начало толстого кишечника, не вызывая каких-либо симптомов. Только 10–20% инфицированных лиц заболевают. Вызванная амёбами ОКИ может протекать как в легкой неинвазивной, так и в инвазивной форме, когда энтамебы проникают в толщу слизистой оболочки кишечника, вызывая образование абсцессов (состояние, известное также как «амебная дизентерия»). Абсцессы затем вскрываются в просвет кишечника, образуя кровоточащие язвы. При распространении амёб по кровяному руслу развивается внекишечный амёбиаз, чаще всего проявляющийся абсцессами печени. Также могут поражаться легкие и головной мозг [31].

Лабораторная диагностика протозойных ОКИ
      Традиционным методом лабораторной диагностики ОКИ, вызванных простейшими, является выявление цист и трофозоитов в кале при помощи световой микроскопии. Для микроскопической диагностики необходим персонал, имеющий высокую квалификацию. Поскольку трофозоиты можно обнаружить только в свежих образцах, а выделение цист обычно носит пульсирующий характер, для анализа рекомендуется использовать несколько проб, взятых в разные дни. Так, при исследовании одного образца чувствительность микроскопических тестов составляет 60-80% (лямблии) и 35-50% (энтамебы); при использовании 3 образцов, взятых в течение 10 дней, чувствительность обоих тестов составляет 90-95%.
      Удобной альтернативой микроскопии являются иммунохимические методы — ИФА и иммунохроматография, предназначенные для выявления антигенов простейших в образцах фекалий. Как правило, молекулы антигенов выделяются со стулом больного постоянно и необходимости в повторных анализах не возникает. Чувствительность и специфичность современных иммунохимических диагностикумов, в частности, тест-систем RIDASCREEN (ИФА) и RIDA Quick (экспресс-тесты), превосходят соответствующие показатели микроскопического анализа. Крайне удобными для использования являются двойные тесты (лямблии/криптоспоридии) и тройные тесты (лямблии/криптоспоридии/энтамебы), позволяющие установить возбудителя ОКИ в ходе одного анализа.
Широкое внедрение в лабораторную практику иммунохимических методов выявления антигенов возбудителей ОКИ в фекалиях открывает новые перспективы быстрой диагностики и значительно расширяет представление о структуре заболеваемости.

Сергей Дмитриевич Зайко
Ведущий специалист по продукции ЗАО «Аналитика»

Материал подготовлен для журнала "Справочник заведующего КДЛ" (готовится к печати)  

      Список использованной литературы.
1. Боднев С.А., Малеев В.В., Никифорова Н.А. и др. Этиологическая значимость ротавирусов, норовирусов и астровирусов в структуре острых кишечных инфекций у детей раннего возраста Новосибирска в период сезонного подъема заболеваемости // Инфекционные болезни. 2008. Т.6. С.61-64.
2. Боднев С.А., Тикунов А.Ю., Жираковская Е.В. и др. Распространенность норовирусов среди детей раннего возраста в г. Новосибирске в 2007 г. // Сибирский медицинский журнал, 2008. № 7. С.81-83.
3. Долгих Т.И., Галилейская С.Б. Диагностическое значение определения веротоксина при кишечной инфекции, вызванной Escherichia coli O157 // Справочник заведующего КДЛ. 2009. № 11. С.23-25.
4. Мищук В. И., Гритчина А. В., Пожалостина Л. В. Роль бактериологических исследований в расшифровке этиологической структуры острых кишечных инфекций в Липецкой области // Клиническая лабораторная диагностика. 2005, № 9, с. 54.
5. О вспышечной заболеваемости в Российской Федерации и подготовке к летней оздоровительной кампании 2010 года. Сайт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, протокол № 7 от 13.05.2010 г.
6. Сагалова О.И., Брызгалова И. В., Подколзин А.Т., Малеев В.В. Норовирусная инфекция в многопрофильных стационарах для взрослых // Терапевтический архив. 2009, № 4, с. 60-64.
7. Alpers K., Werber D., Frank C. et al. Sorbitol-fermenting enterohaemorrhagic Escherichia coli O157:H- causes another outbreak of haemolytic uraemic syndrome in children // Epidemiol Infect. 2009. Vol.137. P.389-395.
8. Atmar R.L., Estes M.K. The epidemiologic and clinical importance of norovirus infection // Gastroenterol Clin North Am. 2006. Vol.35. P.275-290.
9. Beutin L., Steinrück H., Krause G, et al. Comparative evaluation of the Ridascreen Verotoxin enzyme immunoassay for detection of Shiga-toxin producing strains of Escherichia coli (STEC) from food and other sources // J Appl Microbiol. 2007. Vol.102. P.630-639.
10. Blanton L.H., Adams S.M., Beard R.S. et al. Molecular and epidemiologic trends of caliciviruses associated with outbreaks of acute gastroenteritis in the United States, 2000-2004 // J Infect Dis. 2006. Vol.193. P.413-421.
11. Castriciano S., Luinstra K., Petrich A. et al. Comparison of the RIDASCREEN norovirus enzyme immunoassay to IDEIA NLV GI/GII by testing stools also assayed by RT-PCR and electron microscopy // J Virol Methods. 2007. Vol.141. P.216-219.
12. Duizer E., Pielaat A., Vennema H. et al. Probabilities in norovirus outbreak diagnosis // J Clin Virol. 2007, Vol.40. P.38-42.
13. Fankhauser R.L., Noel J.S., Monroe S.S. et al. Molecular epidemiology of "Norwalk-like viruses" in outbreaks of gastroenteritis in the United States // J Infect Dis. 1998. Vol.178. P.1571-1578.
14. Fotedar R., Stark D., Beebe N. et al. Laboratory diagnostic techniques for Entamoeba species // Clin Microbiol Rev. 2007. Vol.20. P.511-532.
15. Fraser D., Bilenko N., Deckelbaum R.J. et al. Giardia lamblia carriage in Israeli Bedouin infants: risk factors and consequences // Clin Infect Dis. 2000. Vol.30. P.419-424.
16. Garvey P., McKeown1 P. Epidemiology of human cryptosporidiosis in Ireland , 2004-2006: analysis of national notification data // Eurosurveillance. 2009. Vol .14. P.1-5.
17. Gradus M.S. Cryptosporidium and public health: from watershed to water glass // Clin Microbiol Newsletter. 2000. Vol.22. P.25-32.
18. Hookman P., Barkin J.S. Clostridium difficile associated infection, diarrhea and colitis // World J Gastroenterol. 2009. Vol.15. P.1554-1580.
19. Johnston C.P, Qiu H, Ticehurst J.R. et al. Outbreak management and implications of a nosocomial norovirus outbreak // Clin Infec Dis. 2007. Vol.45. P.534-540.
20. Karch H, Bielaszewska M. Sorbitol-fermenting Shiga toxin-producing Escherichia coli O157:H(-) strains: epidemiology, phenotypic and molecular characteristics, and microbiological diagnosis // J Clin Microbiol. 2001. Vol.39. P.2043-2049.
21. Khamrin P., Nguyen T.A., Phan T.G. et al. Evaluation of immunochromatography and commercial enzyme-linked immunosorbent assay for rapid detection of norovirus antigen in stool samples // J Virol Methods. 2008. Vol.147. P.360-363.
22. Kim S.Y., Sweet S., Slichter D. et al. Health and economic impact of rotavirus vaccination in GAVI-eligible countries // BMC Public Health. 2010. Vol.10. P.253-257.
23. Klein E.J., Boster D.R., Stapp J.R. et al. Diarrhea etiology in a children’s hospital emergency department: a prospective cohort study // Clin Infect Dis. 2006. Vol.43. P.807-813.
24. Lopman B.A., Reacher M.H., Vipond I.B. et al. Epidemiology and cost of nosocomial gastroenteritis, Avon, England, 2002–2003 // Emerg Infec Dis. 2004. Vol.10. P.1827-1834.
25. Lyman W.H., Walsh J.F., Kotch J.B. et al. Prospective study of etiologic agents of acute gastroenteritis outbreaks in child care centers // J Pediatr. 2009. Vol.154. P.253-257.
26. Orth D., Grif K., Zimmerhackl L.B. et al. Sorbitol-fermenting Shiga toxin-producing Escherichia coli O157 in Austria // Wien Klin Wochenschr. 2009. Vol.121. P.108-112.
27. Parashar U.D., Gibson C.J., Bresse J.S., Glass R.I. Rotavirus and severe childhood diarrhea // Emerg Infect Dis. 2006. Vol.12. P.304-306.
28. Parashar U.D., Hummelman E.G., Bresee J.S. et al. Global illness and deaths caused by rotavirus disease in children // Emerg Infect Dis. 2003. Vol.9. P.565-572.
29. Rosser T., Dransfield T., Allison L. et al. Pathogenic potential of emergent sorbitol-fermenting Escherichia coli O157:NM // Infect Immun. 2008. Vol.76. P.5598-5607.
30. Rüssmann H., Panthel K., Bader R.C. et al. Evaluation of three rapid assays for detection of Clostridium difficile toxin A and toxin B in stool specimens // Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2007. Vol.26/ P.115-119.
31. Salles J.M., Moraes L.A., Salles M.C. Hepatic amebiasis // Braz J Infect Dis. 2003. Vol.7. P.96-110.
32. Weitzel T., Reither K., Mockenhaupt F.P. et al. Field evaluation of a rota- and adenovirus immunochromatographic assay using stool samples from children with acute diarrhea in Ghana // J Clin Microbiol. 2007. Vol.45. P.2695-2697.
33. WHO. Entamoeba taxonomy // Bull World Health Organ. 1997. Vol.75. P.291–294.
 

www.analytica.ru


Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!:

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.

Adblock
detector